practica 6 y 7

TINCION DE GRAM

Una ves puesto el campo de esterilizacion, se nos fue entregando el frotis ya antes realizado, ahora tubimos que colocar la preparacion fijada con la solucion de cristal violeta durante 1m.

Despues lo dejamos escurrir y luego lo metemos en yodo durante 1m, despues que haya pasado el minuto lo lavamos con algo y se mete en la otra solucion durante 30 seg, una ves echo eso lo dejamos secar y le ponemos una gota de aceite de imercion.

Por ultimo lo observamos por el microscopio y observamos varios puntitos negros en formas ovaladas, y cirkulares y muchas rayitas.

practica 5

FROTIS

Con el asa bactereologica se va a desarrollar un frotis en un portaobjetos de cristal.

Se toma el asa bactereologica se pone en la flama del mechero dejandola al rojo vivo para que se esterilize, se retira del fuego se toma una pequeña gota de agua destilada, con ella misma se extrae una muestra del material bactereologico que crecio en las cajas petri.

una vez teniendo ese material en el asa de acude a ponerlo en el portaobjetos en la parte central desplazando de izquierda a derecha el material bactereologico hasta que nos quede delgada, una vez teniendola verificamos si ya esta lista para el frotis de la muestra del cultivo.

Ya realizado el frotis se fija de forma directa, se toma el porta de sus partes laterales a lo largo para su transporte.

Por ultimo, se toma el porta de forma lateral para pasarlo por la flama nunca se debe dejar de forma directa en la flama.una vez fijado el frotis queda listo para el proceso de tincion.

practica 3

SIEMBRAS EN MEDIO DE CULTIVO

El alumno debe realizar una siembra en medio de cultivo de forma estriada, variada y aplicando el nombre de cada una de las que se dieron.
Materiales:

-5 o 7 cajas petri de medio de cultivo.
-Asa bacteriologica

-Vaso de precipitado con 25ml. de agua destilada.
-2 mecheros de bunsen

-Papel para mesa de laboratorio

-Tape

-Algodon secoAlgodones con alcohol

-Tubo conico de plastico

Muestras para siembras:

-Saliva
-Muestra interdental
-Orina
-Agua preparada
-Verduras
-Muestra de sangre

Tecnica de extraccion sanguinea:
Materiales:
-Jeringa 5ml.
-Torundas de algodon alcoholosadas
-Torniquete

Se realiza asepxia y antisepxia del pliegue del brazo utilizando una torunda de algodon con alcohol.

Una vez realizado se debe asegurar la aguja a la jeringadandole un pequeño giro hasta que quede apretado. Una vez lista la jeringa y limpia la zona del pliegue se aplica el torniquete en la parte media del brazo para hacer precion t obtener una vaso dilatacion del conducto sanguineo, se intruduce la jeringa y se extraen 2.5ml.

de sangre la que depositaremos en un tubo con tapon rojo sin anticuagulante.No se retita el tapon del tubo se introduce la aguja en el.Se deja coagular la sangre y se toma el tiempo se mete a la centrifuga para separar el paquete del plasma.

Una vez separado el paquete del plasma se trasvasa a un tubo de ensaye vacio.

Se sembrara el liquido plasmatico en medio de cultivo utilizando la tecnica con varilla de cristal denominada siembra por dispercion.

practica 1 y 2

MEDIO DE CULTIVO

Se debe solicitar en el laboratorio un formato para anotar los materiales que se utilizaran en la elaboracion de un medio de cultivo.

El alumno debe de tener su equipo de bioseguridad completo.
Vestir la mesa de laboratorio con papel blanco.

Una o dos personas deben rebicizar que este activada la linea de gas l.p. conectar los mecheros y abrir las balbulas. Habiliatr el equipo de esterilizacion "autoclave" en el cual se debe introducir agua destilada para llevar a cabo la esterilizacion por calor humedo.

Se debe pesar en la balanza granataria el contenido en gramos dependiendo de las cajs petri solicitadas siguiendo las indicaciones que contiene el medio.

Se ocupa rehidratar el contenido del polvo para las 5 o 7 cajas y este se mezclara en el contenido de agua destilada que se requiera para las cajas solicitadas. El polvo se mezclara con agua en el vaso de precipitado para mezclar se utilizara una varilla de cristal como agitador cuidando que no se tengan grumos en el vaso.

Se deben llevar los tiempos de trabajo y acomodarlos en un formato como bitacora.
Una vez reposado el medio de cultivo se expone al fuego del mecher hasta dejar que se presente la ebullicion.

Una vez que se presento la ebullicion se deja enfriar y reposar para taponear y colocarlo en la autoclave.Aplicar tecnica de esterilizacion.

frotis

frotis

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.

Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.

La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.

Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua.

Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.

Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

tarea # 3

TINCIONES

Tinciones:Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.

Mecanismos de Coloración:La coloración celular y tejidos son una combinación de fenómenos físicos y químicos de absorción: los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto grado.

La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican que hay reacción química.Los Colorantes:Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos.

Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.

Preparación de Frotis Bacteriano para Coloración:Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias químicas o por el calor moderado.

Tipos de Tinción:Tinción Simple: utiliza un solo colorante.

Tinción de Gram:Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)

Tinción Ácido Resistente:Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.

Tinción de Giensa:El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias núcleos de la células.

Tinción de Esporas:Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.

Tinción de Cápsula:Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados creando resistencias.

Tinción de Flagelos:Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.

Endósporas:Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la célula los cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida.Las esporas pueden situarse en el centro de la célula o en situaciones excéntricas cerca de un extremo de la misma.

Levaduras:Son esféricas, elípticas y cilíndricos, su tamaño varía notablemente. Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular.

Las Cápsulas:Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las células de algunas especies.

Bacillus Cereus:La mayoría se encuentra en el suelo o en partículas de polvo en suspensión y son uno de los organismos del género Bacillus que pueden ser aislados fácilmente.Puesto que los formadores de esporas pueden aislarse selectivamente a partir del suelo, alimentos o de otro material dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos.

Los bácillus suelen crecer en medios sistemáticos que contengan azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes, etc, como única fuente de carbono y amoníaco como única fuente de nitrógeno.

Sarcina:Son anaerobios obligados y son extremadamente ácido – tolerantes que pueden fermentar azúcares y crecer a pH inferior a 2.Este género comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una célula.

Análisis de Resultados:Existe varios tipos de tinciones de los cuales estudiamos:

Tinción de GramTinción simpleTinción de esporas

Tinción de Gram:Dividida en gram positivo y gram negativo, en el caso de los gram (+) la muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta fijada en su estructura determina la presencia de la misma puesto que fijó en su estructura el cristal violeta.Y en el gran (-) utilizamos salmonella identificada por la presencia de muchas estructura un poco triangulares de color rojo.En la muestra de la práctica anterior 3 eran gran positivo por su coloración morada.

Tinción Simple:Estudia levaduras, en este experimento se usa un solo colorante que fue azul de metileno, donde observamos que las levaduras tenían cocos. Estas células bacterianas difieren desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor.

Tinción de Esporas:La bacteria es una estructura muy pequeña, sin embargo, por medio de esta tinción pudimos observar la estructura interna de la célula bacteriana, particularmente las endosporas, en este experimento se utiliza una tinción simple debido a que la misma permite que se coloree toda la célula excepto la espora que se observa de un tamaño bien aceptable.

tarea #2 medios de cultivo

Medio de cultivo

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientesque en concentraciones adecuadas y en condicionesfísicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.Estos medios son esenciales en el Laboratoriode Microbiología por lo que un control en sufabricación, preparación, conservación y uso, asegurala exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de losresultados obtenidos.

los medios de cultivo se pueden clasificar de la siguiente manera:

Medios naturales : constituidos porsustancias complejas de origen animal o vegetal,las que son usualmente complementadas por laadición de minerales y otras sustancias. En ellosno se conocen todos los componentes ni las cantidadesexactas presentes de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición químicadefinida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos deinvestigación.

Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimientode un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número demicroorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustanciasinhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los quese quieren cultivar.

Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian porser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismosespecíficos.

tarea # 1 salmonela

Salmonella

es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S).

Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.

Algunas salmonellas son comunes en la piel de tortugas y de muchos reptiles, lo cual puede ser importante cuando se manipulan a la vez este tipo de mascotas y alimentos.